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什么是液相色谱固定相?

发布时间:2021-07-13      点击次数:235

        什么是固定相?简而言之就是在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。固定相的选择对样品的分离起着重要作用,有时甚至是决定性的作用。不同类型的色谱采用不同的固定相,如气-固色谱的固定相为各种具有吸附活性的固体吸附剂;气-液色谱的固定相是载体表面涂渍的固定液,液相色谱中的固定相为各种键合型的硅胶小球,离子交换色谱中的固定相为各种离子交换剂,排阻色谱中的固定相为各种不同类型的凝胶等等。以下,恒谱生将简单带大家了解一下固定相的不同类型以及它们有什么特点。

        正相色谱

        正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强。

        正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。

        由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。恒谱生有多款正相色谱柱,比如Diol、SiL色谱柱等,可以用于分析碱性有机化合物,如维生素、类固醇以及其它许多药物分子等。

 恒谱生色谱柱-DSC_9530

        反向色谱

        反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。

        反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

        色谱柱是HPLC分离过程中的核心,而反相色谱柱其分析能力强,常作为分析柱的首先的选择。恒谱生 C18 色谱柱在选择性,梯度和等度条件上都有出色峰形;更高的分离度、灵敏度和重现性;更宽的 pH 耐受性,适合分析各种类型的化合物。除此之外,恒谱生还有多种不同类型的液相色谱柱可供选择,比如C4、C8,ODS等色谱柱。

 DSC_9531

 

        离子交换色谱

        离子交换色谱法的固定相为离子交换剂,常用的有离子交换树脂和化学键合离子交换剂。经典离子交换色谱法的固定相为离子交换树脂,其缺点是易于膨胀,传质较慢,柱效低。不耐高压。

        亲和色谱

        亲和色谱也称为亲和层析,是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基(也称为配体),与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联、制成专一的亲和吸附剂,再用此亲和吸附剂填充色谱柱,当含有被分离物质的混合物随着流动相流经色谱柱时,亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质,而其他的蛋白质及杂质不被吸附,从色谱柱中流出,使用适当的缓冲液使被分离物质与配基解吸附,即可获得纯化的目的产物。它可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白,还可以从血浆中分离抗体。

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         总之,不论是何种类型的固定相对于手性异构体的拆分以及蛋白质和多肽大分子的分离仍在不断的探索完善之中,生物科学在进步,相信未来有关色谱固定相的研究会越来越完善与开拓新的方向。恒谱生作为色谱耗材的高科技制造商,也将助推色谱行业发展,为广大的色谱工作者提供高品质的色谱耗材产品。


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