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在进行hplc分析之前,如何对生物样品进行脱蛋白处理?

点击次数:126 发布时间:2021-07-13

        恒谱生建议各位色谱操作者在进行液相色谱分析前,关注样品过滤的重要性,这是为什么呢?主要是为防止蛋白质等杂质沉积在色谱柱上,上柱前需对生物样品进行去蛋白的预处理。这样可以延长色谱柱寿命并减少维护成本,从而有助于提高实验室通量。

        脱蛋白对于分析生物液体(例如血浆,血清,尿液和脑脊髓液)中的抗生素,残留农药含量等也起着非常重要的影响。并且如果不将沉淀的蛋白质从样品中去除,会导致色谱柱性能下降,最终影响色谱分析结果的准确性。

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        生物样品中去除蛋白质的处理方法有3种:

        利用蛋白质脱水沉淀。采用有机溶剂如乙腈、甲醇等,或中性盐如硫酸铵、硫酸钠等使蛋白质脱水而沉淀。采用乙腈时,产生的沉淀易分离。当用1~3倍体积的有机溶剂时,可使90%以上的蛋白质沉淀。将血浆样品和乙腈混合、离心后,约95%的蛋白质会沉淀。非极性蛋白质(例如白蛋白)则保留在液相中。如果使用保护柱除去剩余5%的蛋白质,则可以直接注射上清液。长期使用时,需要将保护柱进行更换或倒置并冲洗掉,以防止蛋白质进入主柱。

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        恒谱生建议在色谱柱前加保护柱,可以对样品和流动相进行过滤,能够更长时间的维护色谱柱柱效并有效保护色谱柱,延长色谱柱的使用寿命。恒谱生色谱保护柱经设计优化,在各种分离条件下对色谱的影响都极低。其低死体积设计可大幅降低峰扩散和峰拖尾,从而保持分离度和分析效率。耐压上限可达15,000 psi,经济高效地保护了HPLC、UHPLC色谱柱和制备柱产品,发挥良好性能。

        我们有多种型号的保护柱,有直连保护柱、旋转式保护柱,有UPLC、分析保护柱和半制备、制备保护柱,它们结合了不锈钢的强度和PEEK 预填柱芯的方便和高效。更好的满足客户的多种需求。

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        利用蛋白质形成不溶性盐沉淀。常用的为酸性沉淀剂,如三氯醋酸、高氯酸等,或用重金属离子等使蛋白质沉淀。 用C2HCl3O2酸化,离心并用氢氧化钠中和可除去99%的蛋白质。也可以使用C2H3ClO2

        其他方法。加热使蛋白质沉淀,适用于样品对热稳定者。可将样品置沸水浴中,使蛋白质直接变性生成沉淀。或采用超滤和透析方法,除去体液样品中的蛋白质,在处理过程中样品内蛋白质并未变性,结合的待测成分未能被解脱出来而不能检出,此法可测得血清或血浆中游离的待测成分的浓度。但费时,在分析大量的样品时,受到一定的限制。


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