UPLC液相色谱柱冲洗与再生技巧

　　一、UPLC液相色谱柱日常冲洗规范
 

　　使用后即时冲洗
 

　　每次样品检测结束后，先用10% 甲醇 - 水或乙腈 - 水冲洗 20～30 倍柱体积，冲去残留样品、缓冲盐、离子对试剂，避免盐类结晶、样品吸附污染色谱柱。
 

　　含缓冲盐流动相冲洗顺序
 

　　先纯水相冲洗除盐 → 再用高比例有机相(甲醇 / 乙腈)冲洗疏水杂质，严禁直接用纯有机相冲洗含盐流动相，防止盐析出堵柱。
 

　　流速与压力控制
 

　　UPLC 色谱柱粒径小、柱压高，冲洗流速不宜过高，一般控制在0.3–0.5 mL/min，避免压力骤升损伤填料。
 

　　二、不同污染物针对性冲洗
 

　　盐类、极性杂质：纯水或低比例有机相长时间冲洗
 

　　疏水蛋白、大分子杂质：甲醇 / 乙腈梯度冲洗，必要时用 90% 有机相低速冲洗
 

　　离子对试剂残留：用甲醇 - 水 - 0.1% 甲酸或乙腈 - 水体系，长时间梯度洗脱去除
 

　　三、色谱柱再生方法
 

　　反相 C18 类 UPLC 柱再生
 

　　依次冲洗：纯水 → 10% 甲醇 → 50% 甲醇 → 90% 甲醇 → 反向梯度回冲，每步 20～30 柱体积；污染严重可短暂使用少量异丙醇低速冲洗。
 

　　正相 / 亲水色谱柱再生
 

　　使用正己烷、异丙醇、乙醇依次冲洗，避免水相长时间接触，防止填料水解。
 

　　离子交换柱再生
 

　　用高低浓度盐溶液交替冲洗，去除吸附的带电杂质，再用纯水、有机相平衡。
 

　　四、再生禁忌与注意事项
 

　　再生仅适用于轻度污染、柱效轻微下降，柱塌陷、填料流失时无法再生。
 

　　禁止使用强酸强碱、强氧化剂冲洗 UPLC 柱，避免键合相脱落。
 

　　再生全程低流速、缓慢梯度，防止柱压过高损坏色谱柱。
 

　　再生完成后，用常规流动相平衡 30–60 min，待基线平稳后再使用。
 

　　五、UPLC液相色谱柱长期保存冲洗要求

 

　　长期不用时，用80% 甲醇或乙腈水溶液封存，两端拧紧堵头，常温避光保存，避免干燥、微生物滋生。