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液相色谱柱科普知识大全,你真不一定都懂

点击次数:250 发布时间:2020-12-08
   液相色谱柱科普知识大全,你真不一定都懂
  液相色谱柱的选择应根据目标分析物的分子量大小、溶解性、Pka值,以及分离要求、仪器、成本等各方面来考虑,比如说可以根据分离目的选色谱柱,对映体分离常选择手性柱,离子化色谱可选择离子柱,蛋白多肽、DNA可选择凝胶柱或离子交换柱,一般的小分子化合物可选择普通反相柱,如C18、C8柱、苯基柱等等。
  根据实际需求和设备选择填料粒径,普通HPLC一般选择5μm或3.5μm粒径的色谱柱,而UPLC则常使用1.7μm——3.5μm的色谱柱。比表面积,高比表面积有助于分离,低比表面积更适合梯度洗脱程序。
  液相色谱柱的相关知识点扩展:
  1)平均颗粒度,颗粒度分布颗粒度(dp)越小:柱效越高(传质好,涡流扩散小)柱压越高(渗透性差)颗粒分布
  颗粒分布越宽∶柱效低(渗透性差)
  颗粒形状球型∶柱效高、重现性好、柱床结构均匀
  无定型:柱床结构不均匀流动相线性速度不均匀,谱带扩展
  2)键合相化学
  1.影响化合物的分离度
  2.不同键合相对不同种类的化合物分离不同
  3.可能导致色谱的分离机理不同如:C18、C8、CN
  3)含碳量
  1.含碳量越高,k‘值越大(固定相传质效应增加)
  2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分离、水解稳定性好,重现性好、有利于极性化合物的拖尾改善
  3.低含碳量 有利于分析中性及碱性化合物、降低溶剂损耗、填料的端基封口、封口残余硅羟基、减少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  4)填料的端基封口
  封口残余硅羟基、减少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  5)硅胶的活性
  主要影响碱性化合物的保留行为:k',生产硅胶时处理温度不同,硅胶活性也不同,是选择性差异的主要来源,硅胶的杂质含量,重金属含量低,硅羟基活性小,拖尾减小,是色谱柱质量好坏的重要标志,填料的稳定性,硅胶填料,pH:2-8,聚合物填料,pH:2-12,pH值小于2时,键合相水解,液相色谱法能否将某一样品完全分离,主要取决于液相色谱柱的选择性和柱效,这在很大程度上取决于固定相的选择是否适当。
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