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疏水相互作用色谱 (HIC)

发布时间:2021-08-21      点击次数:432

       经常做蛋白质纯化分离实验的色谱工作者,对于疏水色谱(Hydrophobic interaction chromatography,简写HIC)肯定不陌生,血清蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、受体、重组蛋白等化合物纯化都需要用HIC色谱法。HIC在是利用样品分子与固定相的疏水力作用的不同,用流动相洗脱时,各组分迁移速度不同而达到分离的目的。疏水相互作用色谱法具有对蛋白质的回收率高,蛋白质不失活,蛋白质变性可能性小等优点。

       疏水作用色谱固定相的非极性比较弱,流动相多采用高浓度盐缓冲液进行梯度洗脱。温和的分离条件,可以避免反相色谱中由于固定相较强的疏水性和有机流动相引起蛋白质的不可逆吸附和变性,因此特别适用于活性物质的分离与纯化。

 分子

        在进行分析时,需要注意几点:溶液的pH值,pH值的不同对蛋白质纯化的效果也会不同。如果你想要蛋白质洗脱顺利,pH值可以远离其等电点,疏水性减少,蛋白质与固定相配基结合不易,有利于蛋白质洗脱。想要提高层析柱的分离度,可以从提高柱温入手。柱温升高可以使疏水作用增加,吸附能力增加,从而提高分离度。

        层析柱分离效果好不好,不仅是这些因素影响,平常的保养以及使用方法也需要注意。使用一段时间后,可以将柱子冲洗一下,将杂质洗掉,避免杂质影响分析结果,比如杂峰的出现。可以在柱前添加一个色谱保护柱,它可以截留样品中一些强残留、强酸性和强碱性物质,防止它们污染和破坏色谱柱中的填料。恒谱生多款色谱保护柱及柱芯适用于不同的色谱柱,匹配到您的各种需求。恒谱生自主研发的2.1超高压分析保护柱,特别适合用于超高效液相色谱,死体积少,无背压,精心设计,省去中间链接的管路和螺丝接头,更利于操作。

 

 

        疏水相互作用色谱有很多优点,当然也有缺点,比如有的蛋白质在高盐中溶解度降低,所以它的应用能力范围会受到一定限制,比较适合疏水性蛋白质纯化分离。想了解更多色谱资讯,可关注恒谱生!每周定期分享,共同进步!


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