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液相保护柱的选择与使用注意事项

发布时间:2021-12-13      点击次数:272
  来自于色谱系统的污染主要指,HPLC仪器系统中部件磨损而产生的固体颗粒,以及流动相系统过滤不*残留的固体颗粒。来自于样品的污染主要指未*溶解的样品或者已*溶解的样品进入色谱系统中,由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异,导致沉淀析出污染系统。
  特别是对于中药 、天然产物、合成中间体及生物药品的检测,因基质的复杂性,色谱柱受污染的情况会更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等,从而带来检测成本高,测试结果不准确等各种影响。
  以下几种情况建议使用液相保护柱
  1、中药、天然产物及合成中间体等基质较复杂的样品分析--因溶解性差异导致样品析出而污染分析柱的情况比较严重,梯度洗脱时影响更大。
  2、生物样品分析--因样品的不可逆吸附导致的污染,保护柱可先于分析柱承受这种污染,从而延长分析柱寿命。
  保护柱很重要,但选择合适的保护柱更重要,选择或使用不当也可能带来截然相反的效果。
  液相保护柱选择考虑以下几方面因素:
  1、除非特殊情况,一般选择填料基质与分析柱基质*相同的保护柱。
  2、选择保护柱尺寸可按柱体积计算,保护柱体积按分析柱体积的5%-10%即可;如4.6*250mm的分析柱体积约为4ml,保护柱体积可选择在0.2-0.4ml之间为宜。同时,保护柱内径应与分析柱内径相同或相当。
  保护住使用注意事项:
  1、独立式保护柱与分析柱连接时,连接管路尽可能短,且接口切面平常,尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
  2、卡套式保护柱一般未标注液流方向,使用时最好自行标注,并按照标注方向来使用,以免正反向使用后,截留的杂质污染分析柱。
  3、直接填装的短柱型保护柱,出现柱压升高或峰型变差时,可不接分析柱进行反向清洗,清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
  4、卡套式保护柱,柱芯替换时,注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配,同时不易旋拧过紧,以防滑丝。
  5、液相保护柱或柱芯一般不建议超声清洗,因可能对填料表面修饰有影响。
  6、如同一保护柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后,再接分析柱使用。
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