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HPLC、UHPLC 样品制备时该注意些什么?

发布时间:2021-12-21      点击次数:650

        样品过滤是制备色谱分析样品的关键步骤。实验前如果不过滤样品会导致色谱柱筛板堵塞等问题,从而导致背压增高和色谱柱性能下降。最终,这会增加花在色谱仪故障排除和维护上的时间,浪费时间也增加科研人员的工作量。

        对于大多数类型的样品,过滤处理相对比较简单。在进样前用溶剂进样口过滤器对流动相过滤。这一步也非常重要,用色谱过滤头可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质;未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会降低液相色谱柱和泵的性能。使用一段时间后需要定期清洗或更换溶剂入口滤头。

 溶剂过滤器-DSC_6660

        在食品和饮料行业分析时,一些浓糖浆、果肉汁和脂肪等具有粘性或含有大量颗粒物样品是比较难过滤的。并且如果你的样品含有玉米淀粉、糖浆、大豆、蔗糖或水果添加剂等成分,使用标准注射器过滤器也是一项挑战。

        过滤具有粘性样品时需要注意什么问题?手推动粘性样品通过注射器过滤器时,需要用手大力推,需要使用多个注射器,降低效率;由于玻璃料堵塞可能需要增加泵压力;分析容易出现肩峰或分裂色谱峰等等。

        如何更有效地过滤粘性样品?

        可以用带有预过滤叠层的针头式过滤器,叠层由超细纤维组成,可在较大颗粒到达孔径的过滤器之前将其拦截捕获。这能较高效率处理冗长的样品量。

        选择具有正确化学相容性的过滤器也很重要。例如,对水性样品使用疏水性材料会导致背压积聚。选择错误的膜会导致其他性能问题。

 实验室

         恒谱生总结了以下几个HPLC、UHPLC 样品制备注意事项,供大家参考:

        对注射器最好施加均匀适度的压力,以确保产生一致的样品。如果背压开始产生明显阻力,请检查您的过滤器是否有问题。

        如果您遇到过滤背压增高、膜堵塞或由于未过滤的颗粒进入进样器而导致色谱柱性能下降,请考虑使用预过滤叠层。色谱柱性能下降是需要重点关注的问题,平常维护也需要用心。在柱前添加一个保护柱相当于在色谱柱前增加了一段额外的填料,起到了保护整个色谱柱的作用。如果在意增加色谱保护柱可能会引起死体积增大,可以采用恒谱生直联式保护柱套,它可与色谱柱入口直接相连,手紧直联不需要其他的连接管路,也可达到优异的色谱性能,不会增加死体积。

 色谱保护柱-DSC_4973

        如果使用注射器时有强烈的阻力,请勿强行让样品通过。这样做可能会导致不必要的问题,甚至可能导致过滤器泄漏。

        当您有大量样品时,不要自动选择窄直径过滤器。请选择适合体积的直径。

        想了解更多色谱相关知识,关注恒谱生,为您解忧!


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