对hplc色谱柱的了解有多深？

　　hplc色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70Kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2-20um(5-10um)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出，柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。

　　色谱柱了解

　　1）平均颗粒度，颗粒度分布颗粒度(dp)越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小)柱压越高(渗透性差)颗粒分布

　　颗粒分布越宽∶柱效低(渗透性差)

　　颗粒形状球型∶柱效高、重现性好、柱床结构均匀

　　无定型：柱床结构不均匀流动相线性速度不均匀，谱带扩展

　　2）键合相化学

　　1.影响化合物的分离度

　　2.不同键合相对不同种类的化合物分离不同

　　3.可能导致色谱的分离机理不同如：C18、C8、CN

　　3）含碳量

　　1.含碳量越高，k‘值越大（固定相传质效应增加）

　　2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分离、水解稳定性好，重现性好、有利于极性化合物的拖尾改善

　　3.低含碳量 有利于分析中性及碱性化合物、降低溶剂损耗、填料的端基封口、封口残余硅羟基、减少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量（0.1%-1%）

　　4）填料的端基封口

　　hplc色谱柱封口残余硅羟基、减少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量（0.1%-1%）

　　5）硅胶的活性

　　主要影响碱性化合物的保留行为：k'：生产硅胶时处理温度不同，硅胶活性也不同，是选择性差异的主要来源，硅胶的杂质含量，重金属含量低，硅羟基活性小，拖尾减小，是色谱柱质量好坏的重要标志，填料的稳定性，硅胶填料，pH：2-8，聚合物填料，pH：2-12，pH值小于2时，键合相水解，液相色谱法能否将某一样品*分离，主要取决于色谱柱的选择性和柱效，这在很大程度上取决于固定相的选择是否适当。

　　6）色谱柱的规格：内径、检测的灵敏度、样品的容量

　　长度、分离度，理论塔板数、速度、样品的容量、检测的灵敏度

　　7）柱性能评价：购买的色谱柱，使用前都要对其性能进行考察，使用期间或放置一段时间后也要重新检查。柱性能指标包括在一定实验条件下（样品、流动相、流速、温度）下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性，或分离度。一般说来容量因子和选择性因子的重复性在±5%或±10%以内。进行柱效比较时，还要注意柱外效应是否有变化。

　　一份合格的hplc色谱柱评价报告应给出柱的基本参数，如柱长、内径、填料的种类、粒度、色谱柱的柱效、不对称度和柱压降等。