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对hplc色谱柱的了解有多深?

发布时间:2022-01-18      点击次数:142
  hplc色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成,压力不高于70Kg/cm2时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效,减小管壁效应,不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度,其效果与抛光相同还有使用熔融硅或玻璃衬里的,用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钛合金,孔径0.2-20um(5-10um),取决于填料粒度,目的是防止填料漏出,柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定,目的是为了避免管壁效应。
  色谱柱了解
  1)平均颗粒度,颗粒度分布颗粒度(dp)越小:柱效越高(传质好,涡流扩散小)柱压越高(渗透性差)颗粒分布
  颗粒分布越宽∶柱效低(渗透性差)
  颗粒形状球型∶柱效高、重现性好、柱床结构均匀
  无定型:柱床结构不均匀流动相线性速度不均匀,谱带扩展
  2)键合相化学
  1.影响化合物的分离度
  2.不同键合相对不同种类的化合物分离不同
  3.可能导致色谱的分离机理不同如:C18、C8、CN
  3)含碳量
  1.含碳量越高,k‘值越大(固定相传质效应增加)
  2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分离、水解稳定性好,重现性好、有利于极性化合物的拖尾改善
  3.低含碳量 有利于分析中性及碱性化合物、降低溶剂损耗、填料的端基封口、封口残余硅羟基、减少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  4)填料的端基封口
  hplc色谱柱封口残余硅羟基、减少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  5)硅胶的活性
  主要影响碱性化合物的保留行为:k':生产硅胶时处理温度不同,硅胶活性也不同,是选择性差异的主要来源,硅胶的杂质含量,重金属含量低,硅羟基活性小,拖尾减小,是色谱柱质量好坏的重要标志,填料的稳定性,硅胶填料,pH:2-8,聚合物填料,pH:2-12,pH值小于2时,键合相水解,液相色谱法能否将某一样品完全分离,主要取决于色谱柱的选择性和柱效,这在很大程度上取决于固定相的选择是否适当。
  6)色谱柱的规格:内径、检测的灵敏度、样品的容量
  长度、分离度,理论塔板数、速度、样品的容量、检测的灵敏度
  7)柱性能评价:购买的色谱柱,使用前都要对其性能进行考察,使用期间或放置一段时间后也要重新检查。柱性能指标包括在一定实验条件下(样品、流动相、流速、温度)下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性,或分离度。一般说来容量因子和选择性因子的重复性在±5%或±10%以内。进行柱效比较时,还要注意柱外效应是否有变化。
  一份合格的hplc色谱柱评价报告应给出柱的基本参数,如柱长、内径、填料的种类、粒度、色谱柱的柱效、不对称度和柱压降等。
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