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如何保证HPLC 色谱柱有效工作?

发布时间:2022-02-15      点击次数:456

       引入 HPLC 色谱柱的样品通常多种多样且复杂,这些样品可能含有许多与 HPLC 条件不兼容的成分。在没有适当的样品制备或样品预处理的情况下注入此类样品可能会导致色谱柱堵塞。比如残留的蛋白质和高疏水性化合物(如脂质)在反相分离过程中也可能不会完全洗脱出来,它们往往会慢慢吸附到分析色谱柱上并引起问题。

hplc色谱柱-DSC_9537

       不兼容的样品稀释剂和流动相也会导致堵塞问题。如果两者不兼容,当将样品引入流动相时,如果稀释剂与流动相两者对比极性太强,通常会出现样品沉淀。

       流动相缓冲液通常用作 HPLC 中的流动相,重要的是在使用前过滤这些缓冲盐。有时,由于实验室温度的不同,一些缓冲液成分容易沉淀,又或者使用过高浓度的缓冲液也会导致沉淀。

      来自磨损的泵密封件或其他密封件的碎片,长期使用总会发生磨损,这些组件往往会在溶剂管路中产生一些碎屑或者金属离子等。如果不对泵和进样口进行定期维护,杂质往往会到达色谱柱筛板并堵塞色谱柱。

色谱筛板-DSC_9581

      现在我们知道了液相色谱柱被阻塞的问题,我们如何保护它?为了保护 HPLC 色谱柱(分析型和制备型)免受污染,例如进样中的微粒、未过滤的流动相组分或进样器磨损的泵密封/转子密封的碎片,建议使用色谱保护柱。

       保护柱本质上是一个微型色谱柱,理想情况下填充与分析柱相同的填料,并连接在分析柱之前。恒谱生有各种尺寸以匹配不同型号的高效色谱柱的要求。保护柱中的筛板与分析柱中的筛板类似,这意味着任何可能阻塞分析柱的东西都会被保护柱阻塞。然后可以通过简单地更换保护柱或者保护柱筛,从而延长分析柱的使用寿命。

色谱保护柱-DSC_8549

       如何挑选合适的恒谱生保护柱?保护柱的填充材料(固定相)应与分析柱的填充材料相同,以使选择性不会发生变化。保护柱的 ID 应与分析柱的 ID 相同或小于分析柱的 ID,以尽量减少增加的谱带展宽。始终使用 ID 接近色谱柱 ID 的防护装置。保护柱的长度应尽可能短以避免额外的死体积,可以选择恒谱生直连保护柱,直接连接UHPLC和UPLC色谱柱,省去中间的连接管路和接头螺丝,消除溶剂泄露问题与连接死体积,日常操作使用更方便简洁、更易于操作。



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