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HPLC 色谱柱挑选指南

发布时间:2022-03-16      点击次数:495

        一、分离模式

        选择色谱柱的首要任务是选择分离模式。分离分子的方法有很多,其中应用最广泛的包括反相、正相、亲水相互作用、离子交换和尺寸排阻 HPLC。还有一些不太常见但更专业的分离模式,例如使用手性固定相或流动相的特定手性色谱。

        反相色谱柱通常用于非极性或弱极性有机化合物,它包含非极性固定相(如 C18),通常与极性流动相配对。恒谱生C18 AQ 反相色谱柱在水下拥有超越同类产品的寿命,适于极性较大的物质在高水相条件下的分析。但是该方法不适合应用于蛋白质,流动相通常含有低 pH 值的乙腈或甲醇,可能会使蛋白质变性,因此会产生伪峰或导致蛋白质聚集和色谱柱堵塞。

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        二、柱长

        确定分离模式和色谱类型后,请考虑色谱柱长度。理想的柱长在某种程度上取决于您的特定样品和分离模式。一般来说,更长的色谱分析柱需要更长的运行时间,但会产生更好的分离效果。柱长(有时称为“床高”)对于根据大小分离蛋白质特别重要。

        三、填料的大小和类型

        HPLC 柱床由直径通常为 2 至 10 μm 的球形功能颗粒构成。小于 2 μm 的粒径用于UHPLC,超高压液相色谱是在非常高的压力下运行,因此它使用比 HPLC 更小的颗粒。恒谱生2μm硅胶基质色谱填料,孔分布均匀、抗压强度高,由于表面羟基活性高所以在中高压情况下能达到快速分离纯化的效果。一般而言,较小的粒径可提供更高的分离率——但需要注意的是背压也更大,以便将流动相泵入密度更大的色谱柱。

 

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        三、色谱填料的材料

        常见的选择有二氧化硅、羟基磷灰石和交联聚合物树脂。常见的疏水烷基链有 C4、C8 和 C18 等长度。通常,该材料对目标分析物具有一定程度的选择性——做出这种选择对于优化分离度很重要。例如,C18 更常用于分离肽或小分子,而 C4 更适用于蛋白质。

        技术发展也产生了新的粒子类别。一种称为表面多孔颗粒 (SPP) 或核壳颗粒的新型二氧化硅基材料有望实现通过2 μm的粒径实现更高的分离效率。通常,常规粒径小于 2 μm 的 HPLC 色谱柱需要专门的 UHPLC 泵或系统来处理较高的背压。与球形和全多孔的传统二氧化硅颗粒不同,SPP 颗粒由一个实心二氧化硅核组成,其上覆有多孔二氧化硅壳,这些颗粒的优点是它们表现出像 2 微米颗粒一样的效率,颗粒尺寸从 2.6 微米及以上,但在略高于一半的背压下运行。

 

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