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使用制备液相色谱的工作流程和技巧

发布时间:2022-04-09      点击次数:411

        本文的重点是快速液相色谱和高效液相色谱。没有一种完mei的协议适合每一种分离目的。因此,建议为您的特定应用程序优化方法。通过本文中列出的建议以及一些前期阅读和测试,您将轻松纯化您正在寻找的组件。

        一、快速液相色谱纯化

        使用快速色谱法进行纯化的缺点是该方法固有的分辨率较低。快速液相色谱柱使用更大的粒径和柱容量,允许使用更多的起始材料,但以分辨率和纯度为代价。如果化合物不需要更高的纯度,或者如果下一步将进行 HPLC,这可能是您的选择。

        1、确定溶剂系统

        样品的纯度(即混合物中有多少化合物)可以使用薄层色谱法 (TLC) 和组分的相对极性进行定性测定。使用 TLC 预先筛选最佳流动相和固定相将节省时间和金钱。根据所使用的溶剂,您可能需要在通风柜中运行色谱柱,因为存在潜在的危险烟雾。

 液相色谱柱*DSC_6250

        2、确定要使用的列

        选择分离柱时要考虑样品量。色谱柱装载量因粒径和体积而异。一般来说,快速液相色谱柱的最大装载量约为硅胶重量的 10%。较大的色谱柱能够处理千克数量的色谱柱,但如果您没有那么多起始材料,那么您只会在硅胶和额外的溶剂上浪费金钱来运行这些大型色谱柱。在确定液相分析柱、基质和溶剂后,您就可以进行快速分离了。

        3、液相色谱柱

        无论您是自己装柱还是购买一根预装柱,按重量计算硅胶与化合物的比例(即硅胶:化合物)都将帮助您实现更有效的分离。恒谱生提供各种硅胶色谱柱,像uHPLCs高效液相C18-AQ分析柱对亲水性和极性化合物具有更强的保留能力和选择性。

 制备液相色谱柱-DSC_9280

        如果包含了分离不太复杂的溶液需要 30:1 到 50:1 的比率,但更复杂的分离可能需要高达 120:1 的比率。手动运行色谱柱时,切勿让溶剂管线低于硅胶,否则气孔会在硅胶上形成看起来像裂缝的长线。这大大降低了分离的效率。

         二、HPLC纯化

       在 HPLC 上运行样品相当简单,因为在快速液相色谱柱上预纯化过程中确定的许多参数都可以应用于此过程。如果您在没有预纯化步骤的情况下运行 HPLC 分离,请考虑使用上面列出的指南来开发合适的 HPLC 方法。使用 HPLC 时的另一个考虑因素是计算的背压。由于 HPLC 色谱柱的粒径更小,可实现更高质量的分离,因此这些系统往往在高压条件下运行,而闪蒸分离的压力相对较低。使用有关粒径和形状、色谱柱内径和溶剂规格的信息计算估计的背压。

        最后,与恒谱生技术支持专家进行简短讨论可以节省您宝贵的时间,并使您能够在瞬间分离化合物!


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