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hplc溶剂进样口过滤器过滤流动相的重要性

发布时间:2022-06-29      点击次数:437

        缓冲液是一种含有弱酸及其共轭碱(或弱碱及其共轭酸)的水溶液。加入少量强酸或强碱后,缓冲溶液的 pH 值变化很小,当小的环境因素发生变化时,有助于抵消分析方法中的条件变化。缓冲溶液用于将 pH 值保持在几乎恒定的值。由于这种弱酸 (HA) 与其共轭碱之间存在平衡,它们对 pH 变化具有抵抗力。

        一、hplc缓冲液的工作原理

        当一些强酸(更多的 H+)被添加到弱酸及其共轭碱的平衡混合物中时,根据 Le Chatelier 原理,平衡向左移动。类似地,如果将强碱添加到混合物中,则氢离子浓度降低的量小于所添加碱量的预期量。

        在准备缓冲液时,您应该遵守一些一般准则:

校准 pH 计;理想情况下,pH 值高于和低于缓冲液制备的目标值;

称出缓冲盐以提供所需的缓冲浓度;

加入装有 HPLC 级水的容量瓶中,充分混合溶解;

使用 pH 探针和 pH 计,测量溶液的 pH;

通过添加少量强酸和/或强碱将 pH 值调节至所需值;

一旦 pH 值正确,将溶液稀释至最终所需体积并充分混合。

 溶剂

        在 HPLC 中,缓冲液通常用于控制在色谱领域中通常被视为“不需要"的二级相互作用。它们还用于控制分析物的电离状态,以确保它不会以一种以上的电离状态存在。化合物的 pKa 表示其 50% 离子化和 50% 中性的 pH 值。如果您在这个 pH 值下工作,您将看到分裂峰和可变的保留时间。所有方法都应努力使其远离目标分析物的 pKa 至少两个 pH 单位。

        二、准备好的流动相

        在制备等度流动相时,需要进一步考虑以确保良好的方法稳定性。

        尽可能预混合您的流动相,这将消除泵的错误。始终使用相同的方法进行准备;例如,如果您先加水,则应始终先加水。如果您测量单个组件然后混合,则应始终以这种方式进行。请勿更改此过程,因为分析物保留时间的结果可能会有很大差异。

        HPLC 中分析物的保留时间由流动相的极性控制。HPLC 的流动相通常使用可混溶的有机溶剂和水/缓冲液的非极性和极性混合物/组合。选择合适的流动相是 HPLC 方法开发的一个重要方面。在使用流动相和缓冲液之前,应使用溶剂进样口过滤器将其过滤,并对所有水性和有机溶剂进行脱气,以去除所有颗粒杂质并溶解气体。不锈钢材质更耐腐蚀,无需工具或配件,有效防止颗粒进入您的泵。

 溶剂吸滤头-DSC_0060

        三、准备好的流动相

        缓冲液浓度也很重要,通常认为低于 10mM 的浓度不能提供控制硅醇活性或化合物的电离状态所需的缓冲能力,而 10mM 将被认为是反相和 HILIC 的最小有效浓度。对于其他技术(例如尺寸排除),需要显着更高的浓度,并且这些方法的浓度超过 100 mM 的情况并不少见。缓冲液浓度必须仔细平衡,以确保在所有条件下都能达到溶解度。在反相条件下工作时,如果方法包含高水平的有机物(例如跨梯度),您可能需要限制正在使用的缓冲液的浓度,以确保不会发生缓冲液沉淀。

        检查所用溶剂的相容性、相对极性和混溶性。流动相仅使用高纯度溶剂,水应为 HPLC 级或过滤和去离子,一般透明玻璃瓶用于储存流动相,因为玻璃具有化学惰性,便于目视检查。

        流动相对选择性的贡献不亚于固定相,在开发稳健的 HPLC 色谱方法时,选择和制备的注意与批量测试固定相同样重要。


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