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带您了解如何提高hplc柱效

更新时间:2023-04-22      点击次数:900

     当样品被引入填充有多孔颗粒的色谱柱时就开始液相色谱分离过程了。样品被注入并通过流动的液相(流动相)输送通过色谱柱。当分析物遇到固定相时,它们会在不同程度上与其相互作用,并分离成可以分析或收集的纯区域。对固定相具有强亲和力的分析物将在色谱柱上停留更长时间。

空柱管-DSC_4476

       液相色谱柱的柱效是评价色谱性能的一项因素。样品组分是否能在色谱柱中分离,同时取决于固定相的选择、色谱操作条件和填料状况。一般来说,塔盘数越多色谱柱的分离效率越好;或者说塔盘高度越小色谱柱的分离效率越好。今天,恒谱生将讨论如何提高 HPLC的柱效。

 

一、什么是柱效:

       效率是衡量某物效率的指标,换句话说,它的工作可以做得有多好。对于色谱柱,效率是指分离的质量。高分辨率导致窄峰占用更少的空间,这意味着可以分离更多的峰。这是高效色谱柱的基本定义,它是用平板计数理论表示的。

恒谱生色谱耗材-DSC_4533

二、什么是塔板计数:

      塔板计数是列由多个单独的板组成的理论。在分析过程中样品通过色谱柱从一块板移动到另一块板,在每一步都与固定相相互作用。

 

三、什么影响柱效:

      塔板计数公式提供了一些明确的方法来增加理论塔板数从而提高效率。首先是增加保留时间,这是通过增加色谱柱长度来实现的,这样流动相和分析物就需要更长的时间通过。接下来是底部的峰宽。这是色谱图中峰开始和结束的点之间的距离。一般来说,这是由色谱分离度决定的。高分辨率会导致更小的峰宽,而低分辨率导致更宽的峰。影响分辨率的因素有很多,包括色谱柱柱管长度、粒径、温度和体积。然而,这可能只是因为色谱柱在持续使用后会失去其分离能力。

恒谱生色谱柱-DSC_4437

四、提高HPLC柱效可从以下几个方面入手:

(1)降低流动相流速,但会增加分析时间。

(2)固定相用量减少,但色谱柱上样量也减少。

(3)减小固定相的粒径,但不能过多,过多后色谱柱的渗透性也会下降。

(4) 采用低粘度的流动相有利于快速传质,但不利于多组分分析。

(5)适当提高柱温可以降低流动相的黏度,但柱效和分离度也会降低。

 

   今天恒谱生分享的知识先到这啦,希望对您的工作有所帮助!