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如何通过hplc测定浓度及解决常见问题

更新时间:2023-05-08      点击次数:1542

一、要确定样品中某种成分的浓度,应遵循以下步骤:

(1)标准溶液的制备:要确定样品中某组分的浓度,必须制备已知该组分浓度的标准溶液。标准溶液在组成和使用的溶剂方面应与样品相似。必须准备多种不同浓度的标准溶液以创建校准曲线。

(2)校准曲线创建:下一步是通过绘制每个标准溶液的峰面积与其浓度的关系来创建校准曲线。校准曲线是峰面积与浓度之间的线性关系,曲线的斜率代表组分的响应因子。响应因子是峰面积与组分浓度的比值。

(3)从峰面积计算浓度:创建校准曲线后,可以通过测量样品中组分的峰面积并使用校准曲线将峰面积转换为浓度来确定样品中组分的浓度。某组分浓度的计算公式为:浓度 =样品中组分的峰面积/组分的响应因子。

       通过测量色谱图中的峰面积来确定各组分的浓度。峰面积与样品中组分的浓度成正比。组分的浓度越大,峰面积越大。然而其他因素,如色谱柱效率、仪器流速和色谱柱温度都会影响峰面积,因此在确定组分浓度时必须考虑这些因素。要确定一种成分的浓度,必须制备一种已知该成分浓度的标准溶液,并且必须通过绘制每种标准溶液的峰面积与其浓度的关系图来创建校准曲线。

二、要在HPLC中实现准确的浓度测定,应遵循以下步骤:

(1)色谱柱和仪器的校准:为了最大限度地减少错误并获得准确的结果,必须正确校准色谱柱和仪器。色谱柱应定期维护,同时色谱仪器应使用适当的标准和溶剂进行校准。

(2)合适的标准品和溶剂:必须使用与样品相似的合适标准品和溶剂。使用与样品不相似的标准品和溶剂会影响结果的准确性。

(3)样品制备:必须正确制备样品以确保准确的结果。应将样品均质化并过滤,以去除任何影响结果的杂质。样品也应正确进样到色谱柱中,以免柱子过载或影响结果的准确性

色谱柱-DSC_3033

三、解决常见问题:

  在 HPLC 中可能会出现一些影响结果准确性的常见问题。一些最常见的问题包括:

(1)色谱柱退化:随着时间的推移,色谱柱会退化并影响结果的准确性。定期维护色谱柱并使用适当的溶剂和标准品可以减少此问题。

(2)仪器漂移:仪器会随时间漂移,导致组分的保留时间和峰面积发生变化。定期校准仪器可以最大限度地减少这个问题。

(3)样品污染:样品污染会影响结果的准确性。适当的样品制备和过滤可以最大限度地减少这个问题。

      今天恒谱生分享的知识先到这啦,希望对您的工作有所帮助!

恒谱生色谱柱结构图