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  • 先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子。以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲洗,再换成流动相。配制流动相时,应各组分分别量取,比例较小的组分要精密量取,需调pH值时要精密到0.1。反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围,pH值越... 查看更多
  • 无论正在利用何种相互作用,液相柱色谱法都分六个步骤进行:柱平衡样品装载洗涤洗脱清洗色谱柱再生一、柱平衡:大多数液相色谱方案从树脂平衡步骤开始。与目标蛋白质和所选树脂相容的缓冲液通过柱子。一种常见的做法是用5-10柱体积(CV)的平衡缓冲液平衡柱。例如,蛋白质与疏水相互作用树脂的结合在高离子强度下有效。在选择平衡缓冲液时也要考虑目标蛋白质的特性,因为离子强度等缓冲液因素会受到蛋白质稳定性的限制;通常,人们会避免使用会使感兴趣的蛋白质变性或阻止其与固定相相互作用的平衡缓冲条件。二... 查看更多
  • 许多用户对溶剂梯度洗脱分离后LC色谱柱应该重新平衡多长时间有疑问。在这里,我们展示了对于反相和HILIC分离而言,再平衡周期短的令人满意的结果。LC用户通常会提出和讨论关于在溶剂梯度洗脱分离后重新平衡LC色谱柱多长时间的问题。在本文中,我们根据最近对该主题的研究讨论了细节,并表明即使对于HILIC分离,在两个柱体积数量级的短再平衡周期内也可以获得令人满意的结果。一、核心概念在溶剂梯度洗脱模式下使用LC时,必须有一段时间,通常是在分析结束时,在溶剂梯度的第一部分中使用的流动相流... 查看更多
  • 高效液相色谱法是提取和纯化甜味剂的可靠技术。在食品工业中被广泛应用;食品糖的甜味与蔗糖相似,热量只有三分之二。这种五碳糖存在于许多植物中,但大多浓度较低(约1%),因此提取和纯化成本很高。因此,迄今为止,食品糖主要通过化学方法生产,使用催化木糖脱氢。一、在木糖转化中引入HPLC一种有吸引力的替代方法是通过发酵将生物质(例如麦秸)中的木糖转化为食品糖。通过该工艺,甜味剂可以在温和条件(大气压和环境温度)下以高产率生产,不含有害化学物质。一旦微生物合成了所需的糖醇,就可以通过高效... 查看更多
  • 温度的变化会对色谱分析方法的重现性和色谱柱的寿命产生重大影响。但为什么会这样?恒谱生在以下的内容将会为您介绍。一、再现性随着温度的变化,液相色谱柱内固定相和流动相之间的热力学会受到直接影响。在不同温度下运行方法可能会影响分析物容量因子(k)或分析物在色谱柱上的保留时间。在升高的温度下,流动相和分析物的动能都会增加。分析物动能的增加将导致它们更强烈地移动和振动,并将破坏分子间结合,即分析物和固定相之间的分离和保留机制。很多时候,这会导致所有分析物更快地从液相色谱柱中流出,从而缩... 查看更多
  • 缓冲液是一种含有弱酸及其共轭碱(或弱碱及其共轭酸)的水溶液。加入少量强酸或强碱后,缓冲溶液的pH值变化很小,当小的环境因素发生变化时,有助于抵消分析方法中的条件变化。缓冲溶液用于将pH值保持在几乎恒定的值。由于这种弱酸(HA)与其共轭碱之间存在平衡,它们对pH变化具有抵抗力。一、hplc缓冲液的工作原理当一些强酸(更多的H+)被添加到弱酸及其共轭碱的平衡混合物中时,根据LeChatelier原理,平衡向左移动。类似地,如果将强碱添加到混合物中,则氢离子浓度降低的量小于所添加碱... 查看更多
  • 影响hplc色谱柱寿命的几个因素主要包含:流动相因素,样品因素与其他因素。色谱柱使用过程中应该注意这些因素,才能有效增加使用寿命。一、流动相因素1、流动相pH不同基质的填料具有不同的pH适用范围。常温下无定形硅胶在纯水中的溶解度约为100mg?L-1,且在pH1~9的范围内溶解的硅胶量几乎是常量,考虑到溶解速度的影响,对于硅胶基质的填料,其所能承受的流动相pH范围约为1~8。键合相硅胶填料则由于键合层的屏蔽作用,使填料对流动相的适应范围大大增加,如现在广泛使用的反相色谱填料C... 查看更多
  • 液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。液相保护柱在使用中最常见的问题:就是柱压升高,如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加,属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高(系统管路堵塞及压力传感器故障除外),可能的原因有如下几点... 查看更多
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