HPLC 液相色谱柱如何选购？

更新时间：2025-06-25 点击次数：386

考虑分析物的性质：
- 化学结构：极性强的化合物在反相色谱柱上保留弱，含芳香环的化合物，使用苯基 / 苯乙基固定相可能效果更好。
- 稳定性：了解分析物对 pH、温度的敏感程度，避免选择在不适宜条件下不稳定的色谱柱。
- 分子量范围：小分子通常使用 80-120Å 孔径的色谱柱；多肽适合 120-200Å 孔径；蛋白质等大分子则需要≥300Å 孔径的色谱柱。
选择固定相：
- 键合相类型：反相色谱中，C18 柱通用性强；C8 柱疏水性稍弱；苯基 / 苯乙基柱对含芳香环化合物有独特选择性。正相色谱适用于极性化合物和异构体分离。亲水作用色谱用于强极性、亲水性化合物。离子交换色谱适用于带电荷化合物。尺寸排阻色谱依据分子大小分离，常用于测定蛋白质、聚合物的分子量分布。
- 键合相密度：高密度覆盖的键合相可减少硅醇基效应，使分析结果更稳定。
- 封端：封端处理可减少残余硅醇基与碱性化合物的次级相互作用，改善峰形。
确定色谱柱尺寸：
- 柱长：较长的色谱柱分离度更高，但分析时间长、柱压高；短柱则相反。快速分析常用 50-100mm 的短柱；复杂样品分离用 150-250mm 的长柱。
- 内径：4.6mm 内径的色谱柱通用性好；1.0mm 或更小内径的微径柱常用于质谱联用；内径大于 4.6mm 的半制备 / 制备柱适用于样品制备分离。
考虑硅胶基质：
- 纯度：高纯度硅胶金属杂质含量低，能有效改善峰形和稳定性；低纯度硅胶成本低，但可能影响结果准确性和重复性。
- pH 耐受范围：常规硅胶柱在 pH2-8 范围内使用，杂化颗粒技术柱 pH 耐受范围可拓宽至 1-12。
- 温度耐受性：常规硅胶柱通常耐受温度低于 60°C，杂化颗粒或特殊键合柱可耐受更高温度。
其他因素：
- 流动相条件：确保色谱柱能耐受流动相的 pH，且流动相中的缓冲盐、添加剂与固定相兼容。
- 仪器系统：根据仪器的耐压能力选择合适的色谱柱，UHPLC 柱需要超高压系统，常规 HPLC 柱在普通 HPLC 系统上即可使用。
- 应用要求：根据分离度、分析速度、灵敏度、稳定性等应用要求选择色谱柱。同时，也要考虑成本因素，在性能和预算之间找到平衡。

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