高效液相色谱仪的主要性能指标

高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理，主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转...

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浅析反相色谱柱的运用和维护

在日常别离剖析工作中，反相色谱柱的正确运用和维护十分重要，色谱柱运用是否妥当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会下降柱效、缩短运用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需留意下列问题，以维护色谱柱。(1)柱子在装卸、替换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，避免柱床产生空地。(2)假如仪器用来做惯例剖析，样品种类有限，但剖析次数多，则不妨为每一类惯例剖析配置一根专用柱，这样有助于延伸柱子的寿命。(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械轰动。温度的忽然变化或者使色谱柱...

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液相保护柱的作用

任何HPLC或UHPLC柱都是有试用寿命的。正确使用和维护色谱柱可以延长其使用寿命，有利于该方法的经济性。重要的是遵循*的色谱惯例，如适当的样品制备（样品应通过0.45µm的膜过滤器进行高效液相色谱过滤，通过0.22µm的过滤器进行超高效液相色谱过滤）；流动相的适当质量/纯度（例如，用于等度模式的等度级溶剂，用于梯度洗脱的梯度级溶剂）；过滤流动相，发展良好的方法，具有足够强的洗脱能力，以尽量减少非特定的吸附；与所选色谱柱兼容的温度、pH值和最大背压范围...

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氨基柱的反相使用

先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50：50)冲柱子。以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的*(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0)，立即用水(0.5ml/min的流速，30倍柱体积)冲洗，再换成流动相。配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有...

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液相色谱工作流程

无论正在利用何种相互作用，液相柱色谱法都分六个步骤进行：柱平衡样品装载洗涤洗脱清洗色谱柱再生一、柱平衡：大多数液相色谱方案从树脂平衡步骤开始。与目标蛋白质和所选树脂相容的缓冲液通过柱子。一种常见的做法是用5-10柱体积(CV)的平衡缓冲液平衡柱。例如，蛋白质与疏水相互作用树脂的结合在高离子强度下有效。在选择平衡缓冲液时也要考虑目标蛋白质的特性，因为离子强度等缓冲液因素会受到蛋白质稳定性的限制；通常，人们会避免使用会使感兴趣的蛋白质变性或阻止其与固定相相互作用的平衡缓冲条件。二...

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