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液相色谱柱在选择时应该注意什么参数变化

点击次数:187 发布时间:2021-02-22
  液相色谱柱,是一种用于液体色谱分析仪器在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等。以下内容对色谱柱的参数进行分析。
  1、色谱柱尺寸
  较长的色谱柱组分保留较强,运行时间较长,柱效更高,分离度效果更好。在实际工作中应综合衡量运行时间和柱效,选择长度适宜的色谱柱。例如含量测定、溶出检测对于分离的要求较低,可选用较短的色谱柱,减少运行时间;有关物质一般选择较长的色谱柱,提高分离效果。
  内径小的色谱柱灵敏度较高,峰型更窄,但是载样量较小。如果载样量满足要求,需要更高更尖锐的峰提高灵敏度,可以选择更小内径。但是如果进样量超过了柱载样量,色谱峰将很大限度变宽。所以应在灵敏度和载样量之间综合衡量。
  粒径小的色谱柱分离度较好,色谱柱压力更大。如果5μm粒径的色谱柱分离度稍有不足,则同型号3μm色谱柱的分离度一般会提供令人满意的选择性。
  如果选择较小尺寸的色谱柱,应衡量柱外死体积对柱效的影响,柱外死体积包括连接管线、进样体积、色谱柱接头与色谱柱连接处的空隙等。所以一般超高效液相使用的色谱柱不适用于常规液相仪。小规格色谱柱应该使用同一品牌的仪器,减少连接处空隙引入的死体积。题外话:岛津、安捷伦、waters之间仪器管线接头和色谱柱不匹配,仪器和色谱柱品牌不一致必然引入较大连接空隙,应注意这方面的影响。
  2、其他参数
  高比表面积具有较强的保留能力、柱容量和分离度,低比表面积能更快达到平衡状态,这点在梯度淋洗中很有意义。
  大孔径的填料可以延长大分子在填料中的滞留时间,达到充分分离,改善峰型。大分子样品一般应选择较大孔径色谱柱,如蛋白质、多肽类。
  单齿键合色谱柱平衡更快;双齿键合稳定性较好,柱容量较大。
  碳栽量大保留较强,分离效果较好。反之保留较弱,分离效果较差。
  封尾(也称封端)柱能减轻碱性组分(阳离子)与硅胶表面残留硅氧负离子作用而引起的色谱峰拖尾现象;对于极性样品经封尾处理与未经封尾处理的色谱柱选择性也不同。一般碱性化合物应选择封尾处理的色谱柱。
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