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液相色谱的基础知识

发布时间:2022-06-10      点击次数:633

       液相色谱作为常用的色谱被广泛应用于生物、化学、食品分析等领域,hplc的种类有哪些?恒谱生带你了解!

        一、液相色谱的种类

       1、吸附色谱

       以硅胶或氧化铝为固定相。分子与硅胶之间的弱相互作用键称为吸附,键的溶解解吸。由于洗脱液分子先于样品分子占据硅胶的活性位点,因此样品分子只有在与活性位点的相互作用强于洗脱液分子时才能被吸附。样品分子通过偶极-偶极相互作用可逆地结合到固定相。固定相对物质的保留时间取决于与固定相表面相互作用的程度不同。这是分离样品成分的机制。

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        2、亲和层析

        使用物质相互反应的趋势作为一种色谱方法。在表现出亲和力的两种成分中,一种是与载体牢固结合的配体,另一种是从洗脱液中吸附的样品。不适合配体的物质不会被吸附并被洗脱液冲向色谱柱出口。

 

       3、凝胶渗透色谱

       与其他色谱方法*不同。这里,洗脱液流动相不与固定相相互作用。样品的物质分离是通过样品分子渗透到固定相的间隙中来实现的。太大的分子被流动相冲走到色谱柱出口。因此,较小的分子稍后到达柱出口。

        在正相分布色谱中,固定相比流动相极性更强;在反相色谱(RP- Reverse Phase)中,流动相比固定相极性更强。固定相可以化学键合到载体材料上,或者载体材料简单地涂有固定相。反相色谱主要用于分析极性或非极性物质。恒谱生的USHA C18-G色谱柱可用于反相分析,一次封尾,PH值适用范围宽,柱效高,具有高选择性和高分离度的优点,非常适合分析胰岛素类物质。

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        4、分布色谱

       也称为分布色谱法,是液相色谱法的一种新方法。它类似于一种分离方法,其中样品在压力下通过液体流动相通过转子中的液体固定相。更好地溶解在固定相中的分析物保留更长时间,而更好地溶解在流动相中的分析物随着液体流动相传输得更快。

        二、高效液相色谱基础

        3.0 HPLC 版本主要区分:等度 HPLC 和 梯度 HPLC。

        在单次运行中仅使用一种洗脱液组合物进行。因此,流动相和固定相之间的相互作用在整个分离时间跨度内是恒定的。用这种方法可以很好地分离特别相似的物质。这种类型的实施方式特别流行,尤其是在常规应用中,应尽可能争取所有。这种方法的另一个优点是您只需要一个泵来泵送洗脱液。

       3.2梯度高效液相色谱

        洗脱液的组成随时间不断变化。以这种方式实现了洗脱液和固定相之间相互作用的不断变化。样品物质从固定相上的交换位置更快地置换出来。这使得在可接受的时间内具有非常不同极性的组件的可分离性成为可能。由于此分离过程开始时的洗脱液成分与结束时的不同,因此在开始分离(平衡)之前确保系统处于平衡状态。洗脱液的混合可以根据每个设备的技术情况以不同的方式进行。

       3.2.1低压梯度

       不同洗脱液的混合在进入泵头之前由比例阀进行,混合物由泵输送通过设备。这被称为低压梯度。在进入泵之前,混合是在工厂的低压侧(大气压)完成的。

       3.2.2高压梯度

        每种洗脱液由一个单独的泵泵送,混合在系统的压力侧进行。为此目的,使用混合室。这样的系统被称为高压梯度 HPLC。洗脱液通过 HPLC 系统的传输会增加压力。在这种情况下,主要部分来自列。根据分离材料、其颗粒和形状、色谱柱长度和使用的洗脱液(不同粘度)压力,最高可达 300 bar 甚至更高。

        三、高效液相色谱基础

        4.0所选 HPLC 系统的组成

        标准 HPLC 至少由五个主要设备组成:泵、进样单元、分离柱、带有评估软件的检测器和馏分收集器。对于 HPLC 分离,使用粒径为 3 至 20 µm 的颗粒。一方面可以实现较大的分离板数,另一方面流动相在通过分离柱的输送过程中必须克服相对较高的背压。所有单元都必须是耐压的,并且最好彼此无死体积连接。

 

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