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深入了解液相色谱柱小型化

发布时间:2022-06-14      点击次数:301

       虽然质谱联用液相色谱已被证明是发现组学(蛋白质组学、脂质组学、代谢组学、食物组学和糖组学)领域的强大工具。组学研究经常受到样本复杂性的挑战。在处理少量样品、小体积和复杂的样品基质(生物流体和单细胞分析)时,对感兴趣的分子进行识别和量化可能特别困难。液相色谱柱小型化可以克服这些挑战。减小色谱柱内径 (ID) 会降低色谱稀释度并提高灵敏度,从而实现更高效的 MS/MS 采样,从而实现更多的分子鉴定。

        当样品量被注入色谱柱并被周围的溶剂稀释时,就会发生这种稀释。在这种情况下,更少的溶剂意味着更少的色谱稀释,这是使用更小的内柱直径的结果。色谱稀释度的降低会导致离子灵敏度的提高,从而实现更有效的 MS/MS 采样,从而实现更多的分子鉴定。恒谱生新推出10#x20空柱管总成,具有较小内径的小型化液相色谱柱可提高灵敏度。

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        从理论上讲,将色谱柱内径从 2.1 mm 缩小到 0.300 mm 会导致样品浓度增加 49 倍,这将转化为灵敏度提高 49 倍。实际上,情况并非总是如此,灵敏度是通过离子强度测量的,离子强度取决于样品浓度以外的其他因素,例如分析物的电离性质,以及 LC-MS 设备(发射器类型)和源参数。

       一、 根据色谱柱类型 (ID),液相色谱中使用的典型流速和样品装载量。

 

色谱柱流量

 

        二、小型化优势

         色谱柱小型化减少了色谱稀释并大大提高了电离效率,这种组合使纳流成为 Omics 领域非常理想的技术,当只有少量样品可用和/或由于添加非挥发性溶剂或需要更好的电离时盐。除了提高灵敏度、更高的 S/N(信噪比)和更低的 LLOQ(定量下限)之外,它还减少了溶剂消耗,从而降低了成本并有益于环境。同时,随着流速的降低,有时需要增加梯度长度。梯度长度的增加会降低样品通量。尽管如此,当需要样品通量、灵敏度和稳定性时,微流是一个很好的中间选择。

 

        此外,色谱柱堵塞和过载也需要被视为微观固体,在蛋白质组学的情况下,未消化的蛋白质会堵塞小 ID 色谱柱,使其无法使用。因此,用户必须小心在进样前正确清洁样品和/或使用捕集(柱前)柱以消除不希望的污染物到达小型柱。当使用捕集柱时,捕集器与柱对齐,样品被装入其中,而不需要的颗粒被浪费。一旦样品被浓缩到捕集阱中并且没有污染物,它就会被导向色谱柱进行分析。使用恒谱生鬼峰捕集柱有助于避免纳米/微米级色谱柱污染并延长色谱柱的使用寿命。鬼峰小柱能够将有机相中污染物,水相中污染物,缓冲盐,流动相瓶和混合过程产生的污染物过滤。

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        色谱分析柱小型化会带来许多挑战,但不可否认的是,好处大于这些挑战。5微流和纳流分离带来全新的生物医学进步和基础科学知识的收获使其成为一种强大的分析技术。


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