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高效液相色谱仪器的组成

发布时间:2022-06-17      点击次数:82

      HPLC 色谱仪器可以是一组单独的模块或元件,但也可以设计为单个装置。模块概念在单个组件失效的情况下更加灵活;此外,系统各个零件不必来自同一制造商。如果您不喜欢自己进行小修,您会更喜欢紧凑型仪器。然而,这并不需要比模块化套件更少的工作台空间。

       一台 HPLC 仪器至少具有溶剂罐、带筛板的传输线、高压泵、进样装置、色谱柱、检测器组成部分。

       一、高效液相色谱仪

       HPLC 仪器通常由九个基本组件组成:流动相/溶剂容器、溶剂输送系统、样品引入装置、色谱柱、柱后装置、检测器、数据收集和输出系统、检测器后洗脱液处理以及连接管和配件。使用一种以上的溶剂是很常见的,因此需要混合器和控制器。如果数据采集是由计算机完成的,它也可以用于整个系统的控制。

       二、溶剂罐

       满足系统不间断运行的足量HPLC溶剂的储存,并由特氟龙管通过在线脱气和过滤器输送到泵中。一般来说,一个系统中至少有两个储液器,通常是玻璃瓶。储液罐及其附件将由玻璃、特氟隆或不锈钢材料制成,这样流动相就不会受到污染。通常,我们使用 HPLC 级甲醇、乙腈、水和缓冲液作为流动相。流动相最好是新鲜调配,如果静置4-5个小时都有可能会发生污染,因此建议流动相进入系统前,使用恒谱生溶剂过滤器进行过滤处理,过滤污染物。

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       二、泵

       HPLC 泵将能够以不同的流速使用单个或多个容器以无脉冲输出吸取溶剂,以允许来自多个容器的不同溶剂/流动相的受控混合。往复泵、注射泵和气动泵是 HPLC 泵的类型。泵的作用是迫使液体(称为流动相)以特定流速通过液相色谱,以毫升每分钟 (mL/min) 表示。

       HPLC中的正常流速在1-2mL/min 范围内。在色谱实验期间,泵可以输送恒定的流动相组成(等度)或增加的流动相组成(梯度)。

       三、混合单元

       混合单元用于混合不同比例的溶剂并通过色谱柱子。

       有两种类型的混合单元:低压混合室,使用氦气对溶剂进行脱气;高压混合室不需要氦气来脱气溶剂。

       溶剂的混合使用装有珠子的静态混合器或使用磁力搅拌器并在高压下运行的动态混合器来完成。

       四、溶剂脱气

       有几种气体可溶于有机溶剂。在高压下泵送溶剂时,会形成气泡,这会干扰分离过程、稳定的基线和峰的形状。因此需要进行脱气。这可以通过使用以下技术来完成:

       真空过滤:可以去除气泡,但并不总是可靠和完整。

      氦气吹扫:通过使氦气通过溶剂。这是非常有效但昂贵的。

       超声波:通过使用超声波仪,将超高频转换为机械振动。这导致气泡的去除。

      五、色谱柱

      色谱柱是 HPLC 系统的核心,它实际上会分离样品混合物中的分子。柱子位于进样器后,流动相与固定相接触,形成与巨大表面的界面。近年来大多数色谱的发展导致设计了许多不同的方法来增加这种界面接触。通常 HPLC 色谱柱的长度为 30 至 250 毫米,直径为 01 至 05 毫米,孔径为 03、05 和 10 微米。色谱柱填充了多孔颗粒,由聚合物制成,并由一层薄薄的二氧化硅和聚苯乙烯(例如 C8、C18 色谱柱)。恒谱生ODS-AQ反相硅胶色谱柱是采用键合距离优化技术的C18柱,严格控制硅胶表面键合C18长链之间的距离,加大固定相与流动相尤其是水的接触面,从而提高极性化合物的保留力。

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      管道结构材料:

      不锈钢(具有高压能力),恒谱生的色谱柱空柱管总成都是采用医疗卫生级的不锈钢材质,可耐高压不易损坏。

      玻璃(主要用于生物分子)

      PEEK(聚醚醚酮)聚合物(对大多数溶剂具有生物相容性和化学惰性)

      六、探测器

      检测器是用于检测从色谱柱中洗脱的样品和色谱柱流出物的工具。检测器将数据转换为电信号并由系统记录。最常见的检测器 UV/VIS 用于药物分析,它允许在特定波长或范围波长(使用 PDA 检测器)上连续监测 UV 吸收。检测器流通池中存在的成分会导致吸光度发生变化。

      高效液相色谱的应用主要是定性分析、检查化合物的杂质、定量分析、药物分离鉴定成分混合物的分离和鉴定、生物制药和药代动力学研究、稳定性研究、纯化等。



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