反相色谱柱在使用缓冲液中需要注意些什么？

　　反相色谱柱为色谱柱提供方便、经济和有效的保护，延长了色谱柱的寿命，分析结果的重现性。随着使用时间的增加，高效液相色谱柱分离效能下降，柱压增高，其原因主要是由于色谱柱进口段的少量填料被污染引起的，而色谱柱整个柱床并未被破坏，使用保护柱，相当于在色谱柱前增加了一段额外的填料，起到了保护整个色谱柱的作用。

　　反相色谱柱特点：

　　采用高度可控的单分子层形成和封尾技术；

　　高的柱间重现性；

　　高的选择性和分离效率；

　　适合分离酸性、中性和碱性化合物，以及许多药物和多肽等。

　　反相色谱柱在使用缓冲液的过程中还要注意以下几点：

　　1.避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用；

　　2.缓冲液要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会发生很多怪现象；

　　3.使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数；

　　4.清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗；

　　5.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，定期用10%硝酸冲洗液路可以避免液路的堵塞；

　　6.反相色谱柱选择缓冲液要用合适的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦；

　　过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，但是不含缓冲盐的溶液。