液相保护柱的作用

任何HPLC或UHPLC柱都是有试用寿命的。正确使用和维护色谱柱可以延长其使用寿命，有利于该方法的经济性。重要的是遵循*的色谱惯例，如适当的样品制备（样品应通过0.45µm的膜过滤器进行高效液相色谱过滤，通过0.22µm的过滤器进行超高效液相色谱过滤）；流动相的适当质量/纯度（例如，用于等度模式的等度级溶剂，用于梯度洗脱的梯度级溶剂）；过滤流动相，发展良好的方法，具有足够强的洗脱能力，以尽量减少非特定的吸附；与所选色谱柱兼容的温度、pH值和最大背压范围。另外值得一提的是，总进样次数与进样体积成反比，例如，如果每次进样10µL样品，这导致柱寿命为5000次进样，则每次进样100µL的样品负载增加通常会将柱寿命缩短至约500次进样。

        即使仔细遵循了上面列出的所有要点，用户有时也会觉得色谱柱的使用寿命应该更长。为了找出如何延长色谱柱的寿命，首先需要了解是什么导致色谱柱老化。

        一、颗粒污染/堵塞色谱柱：

        来自流动相或样品的任何颗粒材料都会污染色谱柱，一些颗粒也可能会迁移到柱填料中。这将导致柱背压增加。这会给泵产生更多的应力，并可能导致柱沉降，形成空洞，从而导致峰值分裂。

        二、非特定吸附：

        高效液相色谱柱在使用过程中可能会遇到许多不同的物质，例如缓冲液中的盐或流动相和样品中的杂质。这些材料的保留率可能低于或高于分离的分析物。如果探测器观察到这些不希望的干扰，则会出现鬼峰、斑点、基线干扰甚至负峰。吸收的杂质可能会对保留机制产生负面影响（缩短保留时间）或开始作为新的固定相（增加保留时间）。为这个主题提供的解决方案是什么？使用液相保护柱！保护柱将过滤所有颗粒，积累非特定吸附材料，还将延长在微碱性pH下使用的分析主柱的寿命。

        三、压力增大

        每个颗粒填充柱包含一系列粒径。粒度分布可能更宽或更窄。在色谱分析过程中，当非加压注射回路连接到加压柱时，柱将承受压力应力。在这些压力应力期间，塔填料受到冲击，然后颗粒可能互换位置，导致通常较大的颗粒上升（朝向塔入口），较小的颗粒下降（朝向塔出口）。在多次注射后，较小的颗粒将积聚在底部，而较大的颗粒将积聚在顶部。较小的颗粒区具有较高的堆积密度背压，用户将观察到背压稳步增加。这再次为仪器产生了更大的压力，并可能导致色谱柱沉降，形成空隙，从而导致峰分裂。

        许多客户要求执行一些程序，将色谱柱重新生成到初始性能。因此，非常仔细地阅读每一列随附的说明书的重要性怎么强调都不为过。该表还包含有关建议的色谱柱保养和再生程序的信息。

        然而，我们可以从理论上分析色谱柱再生的效率。通常，只有在色谱柱制造商允许的情况下，才可以通过反冲模式清洗色谱柱约5到20个色谱柱体积，轻松去除入口颗粒对液相色谱柱的污染。重要的是确保两个柱状熔块（入口和出口）具有相同的孔隙率。请记住，被困在色谱柱填料深处的小杂质颗粒不太可能被清除。由于这种清洗，柱背压应该有所降低。从色谱柱中去除非特定结合物质通常更为困难，结果通常不可预测，因为通常我们不知道这些污染物包含什么化合物。成功率可能在0％到100％之间。对于填充小于5µm颗粒的色谱柱，*恢复色谱柱填充均匀性的可能性很小。通常，柱反冲只在短时间内有效。