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液相保护柱的作用

发布时间:2022-07-16      点击次数:149

任何HPLC或UHPLC柱都是有试用寿命的。正确使用和维护色谱柱可以延长其使用寿命,有利于该方法的经济性。重要的是遵循公认的色谱惯例,如适当的样品制备(样品应通过0.45µm的膜过滤器进行高效液相色谱过滤,通过0.22µm的过滤器进行超高效液相色谱过滤);流动相的适当质量/纯度(例如,用于等度模式的等度级溶剂,用于梯度洗脱的梯度级溶剂);过滤流动相,发展良好的方法,具有足够强的洗脱能力,以尽量减少非特定的吸附;与所选色谱柱兼容的温度、pH值和最大背压范围。另外值得一提的是,总进样次数与进样体积成反比,例如,如果每次进样10µL样品,这导致柱寿命为5000次进样,则每次进样100µL的样品负载增加通常会将柱寿命缩短至约500次进样。

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        即使仔细遵循了上面列出的所有要点,用户有时也会觉得色谱柱的使用寿命应该更长。为了找出如何延长色谱柱的寿命,首先需要了解是什么导致色谱柱老化。

        一、颗粒污染/堵塞色谱柱:

        来自流动相或样品的任何颗粒材料都会污染色谱柱,一些颗粒也可能会迁移到柱填料中。这将导致柱背压增加。这会给泵产生更多的应力,并可能导致柱沉降,形成空洞,从而导致峰值分裂。

        二、非特定吸附:

        高效液相色谱柱在使用过程中可能会遇到许多不同的物质,例如缓冲液中的盐或流动相和样品中的杂质。这些材料的保留率可能低于或高于分离的分析物。如果探测器观察到这些不希望的干扰,则会出现鬼峰、斑点、基线干扰甚至负峰。吸收的杂质可能会对保留机制产生负面影响(缩短保留时间)或开始作为新的固定相(增加保留时间)。为这个主题提供的解决方案是什么?使用液相保护柱!保护柱将过滤所有颗粒,积累非特定吸附材料,还将延长在微碱性pH下使用的分析主柱的寿命。

 反相色谱保护柱-DSC_1674

        三、压力增大

        每个颗粒填充柱包含一系列粒径。粒度分布可能更宽或更窄。在色谱分析过程中,当非加压注射回路连接到加压柱时,柱将承受压力应力。在这些压力应力期间,塔填料受到冲击,然后颗粒可能互换位置,导致通常较大的颗粒上升(朝向塔入口),较小的颗粒下降(朝向塔出口)。在多次注射后,较小的颗粒将积聚在底部,而较大的颗粒将积聚在顶部。较小的颗粒区具有较高的堆积密度背压,用户将观察到背压稳步增加。这再次为仪器产生了更大的压力,并可能导致色谱柱沉降,形成空隙,从而导致峰分裂。

        许多客户要求执行一些程序,将色谱柱重新生成到初始性能。因此,非常仔细地阅读每一列随附的说明书的重要性怎么强调都不为过。该表还包含有关建议的色谱柱保养和再生程序的信息。

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        然而,我们可以从理论上分析色谱柱再生的效率。通常,只有在色谱柱制造商允许的情况下,才可以通过反冲模式清洗色谱柱约5到20个色谱柱体积,轻松去除入口颗粒对液相色谱柱的污染。重要的是确保两个柱状熔块(入口和出口)具有相同的孔隙率。请记住,被困在色谱柱填料深处的小杂质颗粒不太可能被清除。由于这种清洗,柱背压应该有所降低。从色谱柱中去除非特定结合物质通常更为困难,结果通常不可预测,因为通常我们不知道这些污染物包含什么化合物。成功率可能在0%到100%之间。对于填充小于5µm颗粒的色谱柱,完全恢复色谱柱填充均匀性的可能性很小。通常,柱反冲只在短时间内有效。


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