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浅析反相色谱柱的运用和维护

发布时间:2022-07-20      点击次数:42
  在日常别离剖析工作中,反相色谱柱的正确运用和维护十分重要,色谱柱运用是否妥当,直接影响色谱柱的寿命,稍有不慎就会下降柱效、缩短运用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需留意下列问题,以维护色谱柱。
  (1)柱子在装卸、替换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,避免柱床产生空地。
  (2)假如仪器用来做惯例剖析,样品种类有限,但剖析次数多,则不妨为每一类惯例剖析配置一根专用柱,这样有助于延伸柱子的寿命。
  (3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械轰动。温度的忽然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的忽然升高或下降也会冲动柱内填料,因此在调理流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。
  (4)应逐
  渐改动溶剂的组成,特别是反相色谱中,不该直接从有机溶剂改动为全部是水,反之亦然。
  (5)如运用反相色谱柱柱温操控设备时,应留意在通人活动相后才干升温。
  (6)一般说来反相色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱能够反冲时,才能够反冲除掉留在柱头的杂质。否则反冲会迅速下降柱效。
  (7)选择运用适合的活动相,以避免固定相被破坏。有时能够在进样器前面连接一个预柱,剖析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使活动相在进入剖析柱之前预先被硅胶“饱满”,避免剖析柱中的硅胶基质被溶解。
  (8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内,需求对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个维护柱。维护柱一般是填有类似固定相的短柱。维护柱能够并且应该经常替换。
  (9)经常用强溶剂冲刷色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路体系中活动相的置换应以相混溶的溶剂逐步过渡,每种活动相的体积应是柱体积的20倍左右,即惯例剖析需求50-75mL。
  (10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
  (11)反相色谱柱运用过程中,假如压力升高,一种或许是烧结滤片被堵塞,这时应替换滤片或将其取出进行清洗;另一种或许是大分子进人柱内,使柱头被污染;假如柱效下降或色谱峰变形,则或许柱头出现塌陷,死体积增大。
  (12)在完成别离剖析工作之后,不该当即停机,需及时对色谱剖析体系进行冲刷,一般0.5h以上,以除掉色谱柱内的杂质。
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