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高效液相色谱法检测类胡萝卜素

发布时间:2022-08-12      点击次数:149

一、什么是类胡萝卜素:

       类胡萝卜素是自然界中广泛存在的黄色、橙红色或红色多烯物质。它们是在胡萝卜中发现的,因此得名。人体不能合成类胡萝卜素,因此主要通过食物获得。水果和蔬菜是类胡萝卜素的主要食物来源。

       类胡萝卜素由8个类异戊二烯单元组成,根据分子组成可分为胡萝卜素和叶黄素两大类。前者只含有烃和氢两种元素,而后者是前者的含氧衍生物,含有一个或多个氧原子形成羟基、羰基、甲氧基和环氧化合物。类胡萝卜素最重要的代表是β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、玉米黄质、虾青素和斑蝥素。

       二、类胡萝卜素的作用:

       膳食类胡萝卜素是维生素的前体,可预防多种慢性退行性疾病。类胡萝卜素分析对于了解它们对人类健康的重要性是必要的。然而,现有的用于分离主要类胡萝卜素的高效液相色谱 (HPLC) 方法需要更长的分析时间,并且不能充分分离紫黄质和新黄质。

      类胡萝卜素的一些特性,例如它们在自然界中的存在、不同的浓度、对异构化的敏感性以及高度不饱和类胡萝卜素的氧化,使得单个类胡萝卜素的量化成为一项 具有挑战性的任务。在分析类胡萝卜素时,需要采取预防措施以尽量减少异构化、氧化和降解。

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       三、分离方法:

       已经采用了多种方法来检测食品样品中的类胡萝卜素,从薄层色谱到高压液相色谱 (HPLC) 以及 HPLC 与包括 MALDI-TOF 在内的质谱相结合。鉴定和定量类胡萝卜素多用的方法是利用 HPLC 与紫外-可见吸收检测相结合。

       虽然使用正相和反相HPLC都可以进行类胡萝卜素的分离,但是由于非极性类胡萝卜素的分离较差,正相HPLC不适用于类胡萝卜素的分离。相比之下,反相 HPLC 能够显着增加分析物和非极性固定相之间的相互作用,从而提高类胡萝卜素的分离度。

       四、C18色谱柱:

       在这些色谱柱中,等度或梯度模式的 C18 色谱柱是类胡萝卜素分离的一种选择。与 HPLC 相比,UHPLC 具有多项优势,例如更高的峰容量、更小的峰宽、更高的灵敏度和更高的色谱分离度。更短的分析时间也大大节省了流动相溶剂。

        USHA C18-G色谱广泛用于分析极性物质和疏水性物质,是集耐久性、良好峰形显示和重现性特别于一身的ODS柱。由于 C30 固定相色谱柱无法用于 UHPLC,因此 C18 色谱柱已被用于类胡萝卜素分离,尽管 C18 柱对类胡萝卜素异构体的分离度较差。

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        五、提取方法:

(根据各种类胡萝卜素在提取溶剂中的溶解度和稳定性确定具体方法)

固相萃取 (SPE)

液液萃取

超临界流体萃取 (SFE)

基质固相分散 (MSPD)

皂化

测定方法:紫外/可见分光光度法

高效液相色谱法(此类方法是分离、鉴定和定量食品和生物样品中类胡萝卜素的一种方法)

       分析 HPLC 类胡萝卜素的检测器是光电二极管阵列 (PDA),但也可以使用电化学检测器 (ECD)、荧光检测器、质谱检测器 (MS) 和核磁共振 (NMR) 等检测器。

       六、流动相:

       类胡萝卜素分离的优化需要进样溶剂和流动相的相容性。理想情况下,进样溶剂应与流动相相容或比反相极性更强,以提供样品的柱上浓度。如果类胡萝卜素在进样溶剂中比在流动相中更易溶解,特别是当溶液接近饱和时,进样时类胡萝卜素会沉淀,导致峰拖尾。或者,它们会在通过色谱柱时保留在进样溶剂中,从而产生宽带和双峰 。另一方面,如果进样溶剂太弱,样品将不会完全溶解在流动相中。

       样品和溶剂过滤可防止小容量进样器接头堵塞、划伤和泄漏。回路或废液管路堵塞会导致高背压和回路填充困难。位于阀进样器和色谱柱之间以减少谱带展宽的低死体积接头也容易堵塞。导致 HPLC 问题的其他因素包括不匹配或损坏的进样器组件、可变的样品量、泄漏和增加的系统压力。通过过滤,经过适当调整和清洁的注射器应持续 5,000 次注射。

       选择合适的过滤器需要了解过滤器/溶剂的兼容性以及过滤器的化学/物理特性。恒谱生建议客户选择多阶不锈钢进样口过滤器,配套用于外径1/8英寸或1/16英寸的管子,放置于流动相溶剂瓶中,过滤杂质。

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       选择不正确的过滤器可能会导致可萃取物质危及分析结果。对于色谱分析,由可萃取材料引起的情况包括样品吸收、共流出和外来峰。




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