一、正确使用方法
1.安装与操作方向
-安装时需移除
C18色谱柱两端的堵头，并确保流动相方向与柱上标记一致。若需反向冲洗（如清除入口端堵塞），应严格按照厂家说明操作，避免频繁反冲导致筛板或填料损坏。
-连接时密封卡套需适度拧紧，过紧可能导致泄漏，过松可能引发柱床空隙。
2.流动相与样品处理
-流动相要求：使用前需经0.45μm滤膜过滤并脱气（如超声脱气5分钟），防止颗粒或气泡进入色谱柱。
-样品前处理：所有样品和缓冲液必须过滤（0.22μm或0.45μm滤膜），复杂样品（如生物样品）需通过液-液萃取或固相萃取净化，减少柱污染风险。
3.pH与压力控制
-pH范围：常规C18柱流动相pH应控制在2-7之间，避免键合相水解或硅胶基质溶解。极性改性C18柱可耐受pH 1.5-10，但需参考厂家说明。
-操作压力：实际压力应低于填装时最高压力（通常≤3000psi），长期高压运行会损坏色谱柱和输液泵。
4.梯度与温度管理
-梯度洗脱：起始流动相建议为5%有机溶剂（如甲醇/乙腈）水溶液，逐步递增至高有机相比例。
-柱温控制：使用柱温箱时，需先通入流动相再升温，避免压力骤变影响柱效。
二、清洗方法
1.日常清洗（实验后）
-含盐流动相：先用高比例水相（90%水/10%有机溶剂）以1.0mL/min流速冲洗30-60分钟，置换盐类；再用50%甲醇/水或乙腈/水冲洗30分钟，清除疏水性杂质。
-含胺类流动相：使用50%甲醇+0.05%磷酸溶液混合溶剂冲洗，避免胺类残留。
2.深度清洗（污染严重时）
-逆流洗涤：将甲醇或乙腈以逆流方式通过色谱柱，分散样品残留。
-酸碱洗脱：根据污染物性质选择酸性（如0.1mol/L H₃PO₄）或碱性（如0.1mol/L NaOH，仅限耐碱型柱）溶液清洗，需冲洗至中性。
-有机溶剂梯度：从低浓度（30%）逐步增至高浓度（100%）有机溶剂（如甲醇、乙腈、异丙醇），每步10-20分钟。
3.再生处理（柱效下降时）
-常规再生：依次用甲醇、CHCl₃、甲醇/水各60mL通过C18色谱柱，再用100%甲醇平衡后封存。
-顽固污染：采用水→甲醇→氯仿→乙烷顺序冲洗，再反向冲洗一次，每次60mL，最后用100%甲醇平衡。
三、保存方法
1.短期保存（1-2天）
-用纯有机溶剂（甲醇或乙腈）以0.5mL/min流速冲洗60分钟，密封两端堵头，防止溶剂挥发。
2.长期保存（超过1个月）
-清洗：按日常维护流程完成缓冲盐置换和有机溶剂清洗，再用纯有机溶剂冲洗60分钟。
-防干裂措施：柱两端安装灌满甲醇的容器（或密封后存放），定期补充溶剂防止蒸发。
-储存环境：置于阴凉、干燥、避光处（室温最佳），避免高温（>75℃）或温度剧烈波动。
3.定期唤醒维护
-长期闲置的C18色谱柱需每隔1-2个月重新安装，用100%甲醇或乙腈以低流速（0.3-0.5mL/min）冲洗30-60分钟，再按活化流程平衡。
四、关键注意事项
-避免高水相条件：水相比例超过90%可能导致固定相疏水塌陷，建议控制在≤90%。
-禁止强酸强碱：普通C18柱不可用强酸（如浓硫酸）或强碱（如NaOH，除非明确耐碱）清洗。
-反冲需谨慎：仅在必要时反向冲洗，且需控制流速和时间，避免损坏柱头筛板。
-保护柱使用：配置专用保护柱可延长分析柱寿命，保护柱填料颗粒度应与分析柱一致。
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